Gesundheit / Laborreagenzien
Bedienungsanleitung für GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System
Schnellstartanleitung und technisches Handbuch für das GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System. Erfahren Sie mehr über die Vorbereitung der Reaktionsmischung, Lagerbedingungen, Thermocycler-Protokolle und Kontaminationsvermeidung.
Schnelle Antworten aus der Anleitung
Kurze Antwort
- Dieses Handbuch beschreibt die Verwendung des GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR-Systems, einschließlich der Vorbereitung der Reaktionsmischung, der Zugabe von Referenzfarbstoff und der Thermocycling-Parameter. S. 1, 7, 8
Wichtigste Schritte
- Zugabe von CXR-Referenzfarbstoff S. 7
- Zusammenbau der RT-qPCR-Reaktionsmischung S. 7, 8
- Durchführung des Thermocycling S. 8, 9
Erste Inbetriebnahme
- Reagenzien auftauen S. 7
- Reaktionsmischung vorbereiten S. 7, 8
- RNA-Template hinzufügen S. 8
- Versiegeln und zentrifugieren S. 8
Technische Daten
| Parameter | Wert | Hinweis | Seiten |
|---|---|---|---|
| Reaktionsvolumen | 20µl | Endvolumen der Reaktion | S. 7 |
| Lagertemperatur | -30°C bis -10°C | Empfohlene Lagertemperatur für alle Komponenten | S. 4 |
| Primer-Konzentration | 200nM–1µM | Empfohlener Konzentrationsbereich | S. 5, 8 |
| Sonden-Konzentration | 100–300nM | Empfohlener Konzentrationsbereich | S. 5, 8 |
Wo es im PDF steht
- Produktbeschreibung S. 1, 2, 3
- Komponenten und Lagerung S. 4
- Protokoll S. 6, 7, 8
- Thermocycling S. 8, 9
Inhaltsverzeichnis
Wichtige Informationen aus der Anleitung
Das GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System ist für quantitative PCR-Assays im Hydrolyse-Sonden-Format optimiert. Es kombiniert GoScript™ Reverse Transkriptase und GoTaq® Probe qPCR Master Mix für eine effiziente Echtzeit-Amplifikation. Die Hot-Start-Chemie ermöglicht die Vorbereitung der Reaktion bei Raumtemperatur.
Lagerung und Handhabung
Alle Komponenten müssen bei -30°C bis -10°C gelagert und stets vor Licht geschützt werden. Für beste Ergebnisse sollte die aufgetaute Lösung vorsichtig gemischt werden, um Belüftung und Schaumbildung zu minimieren. Die Lagerung auf Eis während der Verwendung wird empfohlen.
Vorbereitung der Reaktionsmischung
Die Vorbereitung erfolgt durch Kombination von GoScript™ RT Mix, GoTaq® Probe qPCR Master Mix mit dUTP, Primern, Sonde und Nuclease-freiem Wasser. Die RNA-Vorlage wird im letzten Schritt hinzugefügt. Das Gesamtvolumen beträgt standardmäßig 20µl.
Thermocycler-Protokolle
Das System unterstützt sowohl Standard- als auch FAST-Cycling-Bedingungen. Die Standard-Bedingungen umfassen eine Reverse Transkription bei 45°C für 15 Minuten, gefolgt von einer Aktivierung bei 95°C für 2 Minuten und 40 Zyklen der Denaturierung (95°C, 15 Sek.) sowie Annealing/Extension (60°C, 1 Minute).
Kontaminationsvermeidung
- Verwenden Sie dedizierte Arbeitsbereiche und Pipetten für Vor- und Nach-Amplifikationsschritte.
- Tragen Sie Handschuhe und wechseln Sie diese häufig.
- Verwenden Sie aerosolresistente Pipettenspitzen.
- Öffnen Sie die Reaktionsplatte oder Streifen-Wells nicht nach Abschluss der Amplifikation.
Praktische Hilfe
Typische Probleme
Kontaminationsrisiko
Verwenden Sie dedizierte Arbeitsbereiche, aerosolresistente Pipettenspitzen und öffnen Sie die Platten nicht nach der Amplifikation.
Instabile Reagenzien
Lagern Sie alle Komponenten bei -30°C bis -10°C und schützen Sie diese vor Licht. Vermeiden Sie mehr als 10 Gefrier-Auftau-Zyklen.
Vor der Verwendung
- Reagenzien auftauen (nicht bei erhöhten Temperaturen).
- Master Mix vor Gebrauch 3-5 Sekunden vortexen.
- CXR Reference Dye bei Bedarf hinzufügen (je nach Instrument).
- Reaktionsmischung ohne RNA-Vorlage vorbereiten.
- RNA-Vorlage erst im letzten Schritt hinzufügen.
- Platten kurz zentrifugieren, um den Inhalt am Boden zu sammeln.
Technische Daten in der Praxis
- CXR Reference Dye
- Dient zur Normalisierung bei Echtzeit-PCR-Instrumenten. Konzentration muss je nach Gerät (Low-Dye oder High-Dye) angepasst werden.
- Hot-Start-Chemie
- Ermöglicht die Vorbereitung der Reaktion bei Raumtemperatur, ohne vorzeitige Amplifikation.
Abbildungen und Diagramme
- Abbildung 1 zeigt den Arbeitsablauf: Vorbereitung der Reaktionsmischung, Durchführung der RT-qPCR auf dem Instrument und anschließende Datenanalyse.
Modellkompatibilität
- Kompatibel mit Standard- und FAST-Cycling-Programmen.
- CXR-Farbstoffkonzentration muss basierend auf dem verwendeten Real-Time-PCR-Instrument gewählt werden (30nM für Low-Dye, 500nM für High-Dye).
Autor der Aufbereitung
Laura Fischer
Fachredakteurin für Gebrauchsanleitungen
Beschreibt zentrale Funktionen, Einsatzbereiche und Hinweise aus Handbüchern in einer kompakten und nutzerfreundlichen Form.